1 范围
本标准规定了牛冷冻精液人工授精技术要求。
本标准适用于通辽地区养牛场（户）和人工授精站。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 5458 液氮生物容器
NY/T 1335 牛人工授精技术规程
DB1505/T 074 牛妊娠诊断技术规程
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1 冷冻精液
指利用器械以人工方法采集种公牛精液，经过检查、稀释、平衡并利用液氮冷冻、保存。
3.2 解冻
冷冻精液细管直接置于38℃～40℃水浴中，恢复精子活力的处理方法。
3.3 人工授精
是指利用器械以人工方法采集种公牛精液，经过检查、稀释、平衡、冷冻、保存及解冻等的特定处理后，用器械输入发情母牛的生殖道中，使母牛妊娠的一种繁殖技术。
3.4 发情鉴定
通过观察或检查母牛外部行为征兆和内部生殖器官变化，判断卵巢卵子发育和排出等活动情况和发情阶段。
3.5 妊娠检查
通过母牛外部征兆观察、直肠检查和仪器检查等确定母牛是否妊娠的技术。
4 母牛发情鉴定
4.1 外观表现
通过观察母牛外部行为征兆判断母牛发情阶段，见附录A。
4.2 直肠检查
通过直肠检查卵巢、触摸卵泡发育状况，判断母牛发情排卵时间，见附录B。
4.3 电子发情监测法
将母牛行为监测仪安放在母牛的适当部位，采集母牛的行为活动量；将触发天线安装于母牛出入口，当母牛经过触发天线时，激活母牛行为检测仪，并将母牛身份和母牛行为活动量等识别信息数据经过编码、调制后发送至无线读写控制器；计算机管理信息系统软件通过对各个母牛行为活动量掌握牛只的发情状况、配种时间。
4.4 尾根喷漆法
将鉴定母牛每天在尾跟上部喷漆或专用蜡笔涂抹，根据有漆和无漆确定母牛发情。记录发情牛的第一次稳爬时间、发情结束时间以及发情持续时间。准确推算适时配种。
4.5 适时输精
母牛接受爬跨行为后10h～15h第一次输精,然后隔8h～12h可再输一次。
5 冻精质量、贮存和运输
5.1 冻精质量
5.1.1 活力、密度、有效精子数、畸形率、细菌数等质量符合NY/T 1335要求。
5.1.2 细管完整，字迹清楚，应有生产单位简称、品种、编号、生产日期。
5.1.3 装细管冻精的纱布口袋干净，标签清楚。
5.1.4 冻精在购进、入库和输精前进行质量检测。
5.2 冻精贮存
冻精贮存于液氮生物容器（液氮罐）的液氮中。液氮罐应符合GB/T 5458的规定。及时添加液氮，保证冻精始终浸在液氮中，保持液氮面高于冻精。应经常检查液氮罐的状况，保证液氮容器完好，液氮罐出现外壳结白霜应立即更换。定期清洗液氮罐。
5.3 冻精运输
运输冻精时，应使用专用液氮容器（有保护外套）,添满液氮，固定容器盖，液氮罐不得倒放及碰撞和强烈震荡。远途运输冻精时，备足液氮，及时补加。
6 输精前准备
6.1 母牛保定
将待输精的母牛保定, 尾巴向右上方拴系提起。
6.2 选取冻精
取下液氮罐盖，选择所需冻精筒或冻精纱布袋。用镊子准确选出所需的冻精，核对细管冻精标记的公牛编号，应与预配公牛号相符。迅速放置恒温水浴锅中解冻，冻精在液氮外停留时间不应超过5s。盖上液氮罐盖。
6.3 解冻
6.3.1 冻精解冻温度应在38℃～40℃,时间是15s～20s。冻精的棉塞端朝下在恒温水浴锅中缓慢摇动。
6.3.2 解冻后精液应在1h内及时输精。冬季外界温度低时应做好精液保温。
6.4 装输精枪
6.4.1 冻精解冻后,用纸巾吸干。
6.4.2 持细管的末端,应尽快地将细管的棉塞端穿入输精枪（采用塑料套管式金属输精器）内。将装好的授精枪垂直握住,用洁净、干燥剪刀剪切冻精细管封口端10mm处。
6.4.3 取出枪套将枪管套上,用手捻枪套向下直到枪的圆锥座处,只触摸枪套的开口端,以保持接触牛的一端清洁。应使用具有双层保护的输精枪外套。
7 输精
7.1 输精员应修剪指甲。
7.2 母牛在输精前外阴部应用清水清洗,然后用 0.3‰新洁尔灭溶液或酒精棉球消毒,待干燥后,再用生理盐水棉球擦拭。
7.3 发情母牛每次输入1支解冻后的冷冻精液。
7.4 采用直肠把握子宫颈深部输精法。输精员一只手戴上一次性长臂手套,用水沾湿,手呈锥形,手心向上伸入直肠后手心转下,找到并握住子宫颈,同时臂肘向下轻压,使阴门张开。另一只手将输精器插入阴道,先自阴门向前向上插入约13cm～17cm,再向前向下插入,两手相互配合,使输精器尖端对准子宫颈口, 缓缓导入子宫颈内5cm～8cm,然后注入精液,亦可在进入子宫颈内口1cm～4cm的子宫体部输精。输精应做到轻入、慢注、缓出。
8 做好配种记录
记录应及时、准确，见表1。
表1 母牛配种记录表
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序号 |
畜 主 姓 名 |
畜 主 住 址 |
牛 耳 号 |
母 牛 品 种 |
母 牛 年 龄 |
母 牛 胎 次 |
发 情 时 间 |
输 精 时 间 |
冻 精 编 号 |
冻 精 来 源 |
复 配 时 间 |
预 产 期 |
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9 妊娠检查
采用外部观察法和直肠检查法，执行DB1505/T 074。
10 效果评定指标
第一情期受胎率：指第一情期输精后，妊娠母牛头数占输精母牛头数的百分比。
第一情期受胎率=
平均情期受胎率=
总受胎率=
产犊率=
犊牛成活率=
繁殖成活率=